Técnica Amino Cupro Argéntica para revelar neurodegeneración

El poner de manifiesto en forma selectiva las neuronas que se encuentran en procesos de degeneración irreversible representa un importante desafío aún en el presente. A lo largo de los años, fueron perfeccionados los métodos para disminuir la señal del tejido normal y contrastar los procesos degenerativos.  Así fue que se desarrollaron varias técnicas en las cuales se logro la supresión de la impregnación de las fibras normales y se aumentó la impregnación de los axones degenerados (de Olmos y col  1969, 1972, 1981,1984).  La técnica llamada Amino-Cupro-Argentica (A-Cu-Ag) (de Olmos y col., 1994) es la última modificación de los métodos argénticos desarrollados para la tinción selectiva de la degeneración neuronal.  Es una técnica muy sensible para revelar los cambios neurodegenerativos inducidos por diferentes tipos de injuria.  El aumento del contraste de la expresión argirofilica de los procesos degenerativos, tanto somáticos como de terminales, permite observar el cuadro neurodegenerativo aún con objetivos de baja magnificación. Esta característica convierte a la técnica A-Cu-Ag en una herramienta ideal para la descripción neuroanatómica completa de las estructuras cerebrales involucradas en respuesta a diferentes agentes que causan daño neurodegenerativo irreversible.

Es importante destacar que la técnica A-Cu-Ag puede combinarse con otras técnicas histoquímicas e inmunohistoquímicas, lo cual permite estudiar con mayor precisión las áreas del sistema nervioso afectadas. La técnica fluorescente Fluoro Jade B, que revela muerte somática,es incapaz de revelar el cuadro de neurotoxicidad con detalles morfológicos suficientes para poner de manifiesto procesos de degeneración terminal.  Esta observación es de suma importancia ya que, en un proceso neurodegenerativo, el análisis de la degeneración de terminales permite establecer relaciones anatómicas entre las diferentes estructuras afectadas.

El laboratorio de Neuroanatomía e Histología Experimental ofrece una de las técnicas de plata mas sensibles para detectar neurodegeneración debido a que:

-se puede apreciar con un alto contraste terminales sinápticas, dendritas, cuerpos celulares y axones en estado de desintegración degenerativa.

-revela características de la neurona que no se pueden apreciar con otras técnicas, como la hematoxilina Eosina, evitando así  falsos negativos.

-Debido a su precisión en revelar degeneración, se minimiza la cantidad de sujetos por grupo.

-Aun a bajo aumento se pueden apreciar los cambios neuropatológicos

Aplicaciones

Detecta daño causado por:

- Sustancias químicas, drogas y determinadas condiciones ambientales

- Isquemias y traumatismos cerebrales

- Manipulaciones quirúrgicas, ej: adrenalectomías, bulboctomías

- Determinación de neuroprotección frente a diferentes injurias

Técnica de detección de neurodegeneración Fluoro Jade B

En años más recientes otras técnicas no basadas en precipitados de plata han sido desarrolladas, entre ellas el Fluoro-Jade B (FJB) que, al igual que su predecesor Fluoro-Jade, es un derivado aniónico de fluoresceína.  Se ha demostrado que el FJB es útil para el estudio histológico de la tinción de neuronas en degeneración (Schmued y col., 1997; Schmued y Hopkins, 2000) ya que tiene una mayor afinidad que el Fluor Jade, lo que mejora la relación señal/ruido, permitiendo una más fácil detección y documentación de las neuronas degenerativas.  Debido a la simpleza y fiabilidad, la técnica de FJB ha estado ganando popularidad para estudiar diferentes paradigmas de neurotoxicidad. (Descargar publicación en PDF)